sábado, 3 de octubre de 2009
Curso de Cromatografía de Gases - Parque Científico de Madrid
Madrid+D - Entrevista al Prof. Sinisterra
¿Qué servicios presta la Unidad de Biotransformaciones Industriales del Parque Científico de Madrid y en qué áreas?
La Unidad de Biotransformaciones Industriales del Parque Científico de Madrid aporta servicios de apoyo a la I+D+i, siguiendo normas ISO 9000, a empresas, grupos de investigación y hospitales, de diversos subsectores biotecnológicos, químicos o farmacéuticos. En este sentido, la Unidad dispone tanto de un equipo científico altamente cualificado, como de equipamiento e infraestructuras de última generación para la realización de distintos servicios científicos.
La labor de apoyo a empresas que desarrolla la Unidad no se circunscribe a un área de conocimiento concreto, ya que este concepto, de indudable utilidad docente, está desfasado desde la perspectiva actual de la I+D+i. Nuestra labor abarca distintas áreas de trabajo como la biotecnología (que no posee un área de conocimiento específica a diferencia de Europa o EEUU), la química orgánica, la microbiología industrial, la química farmacéutica, la química analítica o la tecnología farmacéutica. Todas ellas intervienen en las distintas industrias con las que colaboramos: alimentaria, farmacéutica, cosmética, etc.
¿Desde cuándo es Responsable de la Unidad de Biotransformaciones Industriales del PCM?
Soy responsable de la Unidad desde su creación en 2006, por acuerdo entre la Universidad Complutense de Madrid (UCM) y el Parque Científico de Madrid (PCM). En la UCM ejerzo como catedrático de la Facultad de Farmacia y en la actualidad comparto mi dedicación docente e investigadora en la Universidad con mi labor como responsable de una de las plataformas tecnológicas del Parque.
¿Qué valor añadido aportan los servicios de la Unidad a la comunidad investigadora y productiva del sector farmacéutico?
Un servicio de calidad a las empresas no se puede prestar sin una investigación actualizada y un conocimiento de las últimas innovaciones que van surgiendo. Esto se aplica a cualquier área de conocimiento. Es precisamente por eso, por lo que desde la Unidad de Biotransformaciones del PCM siempre hemos procurado la colaboración con el Grupo de Investigación en Biotransformaciones BTG que cuenta con investigadores de la UCM, la Universidad Autónoma (UAM) y el Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC). Este grupo tiene investigadores de prestigio europeo en biotecnología, química orgánica y desarrollo farmacéutico.
Por otro lado, la Unidad de Biotransformaciones se compone de personal altamente cualificado: dos técnicos Torres Quevedo y un técnico del PCM. Todos ellos prestan una dedicación al 100% a la Unidad. Además, contamos con tres becarios de investigación del BTG, que también colaboran en trabajos de la Unidad para empresas y OPIs, y con estudiantes, a través de convenios de intercambio como el que mantiene el PCM con el Instituto de Comercio Exterior de Portugal (ICEP), y procedentes de Masteres en Biotecnología de la UAM.
¿Cuáles son los servicios científicos más innovadores que ofrece la Unidad de Biotransformaciones Industriales y de qué forma redundan en los productos o servicios que se comercializan en la actualidad?
Los servicios que ofrecemos son muy diversos y se engloban en dos categorías: análisis y control de calidad; y apoyo alas empresas en I+D+i.
Realizamos análisis y control de calidad según la normativa vigente de farmacopea. Este trabajo es necesario para que una empresa pueda presentar sus productos en el mercado con una garantía de fiabilidad. Es un requisito indispensable en las industrias farmacéutica, cosmética y alimentaria, biotecnológica y de química fina.
También se prestan servicios de microbiología industrial trabajando con microorganismos procariotas para la producción de enzimas o de metabolitos de interés.
¿Cuáles son los retos inmediatos de la Unidad de Biotransformaciones Industriales?
El reto fundamental de la Unidad de Biotransformaciones es la creación de un laboratorio dotado de normas GLP (Good Laboratory Practice) y la implantación de un servicio de calidad homologable por la Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitarios que abra al PCM un nuevo campo de trabajo de apoyo tanto a las empresas incubadas en el PCM, como al resto de empresas y de potenciales usuarios de estos servicios.
Por otro lado, desde la Unidad también se imparten cursos teórico-prácticos, en el marco del programa de formación del Parque Científico de Madrid, sobre cromatografía líquida y su aplicación a laboratorios industriales de control de calidad, de cromatografía de gases y de formación de postgrado en tecnología farmacéutica.
¿Qué tipo de usuario utiliza los servicios de la Unidad?
Prestamos servicios a un amplio espectro de usuarios, en su mayoría empresas privadas externas al PCM, tales como: Abbott, S.A., Cantabria Pharma, LETI…; seguido de empresas incubadas en el propio Parque Científico de Madrid, como Apoteknos; así como a grupos de investigación de las universidades Complutense y Autónoma y del CSIC.
¿Qué ventajas supone la Unidad de Biotransformaciones Industriales para las empresas biotecnológicas incubadas en el PCM?
Las ventajas son numerosas. Las empresas asociadas en el Parque Científico de Madrid, y en este caso concreto las biotecnológicas, pueden acceder a un servicio necesario para desarrollar su actividad a un coste muy asequible. El servicio prestado les permite presentar dossieres en agencias de control de calidad de producción españolas o europeas, al seguirse la normativa de la Farmacopea y de la ASTM (Association of Standard and Testing Materials)en los ensayos que se realizan. Esta política, aplicable también para el resto de plataformas tecnológicas que ofrece el PCM, permite a la comunidad emprendedora disponer de todas las infraestructuras científicas para lograr el éxito de sus proyectos empresariales. La Unidad de Biotransformaciones del PCM tiene a su disposición el asesoramiento del BTG, homologado por la Comunidad de Madrid, pudiendo acceder también a los servicios científicos de esta última, lo que le sitúa en un referente consolidado y de prestigio para los usuarios.
La colaboración con el BTG,de reconocido prestigio europeo en el campo de la Biotecnología, y la presencia en el edificio del PCM en Tres Cantos, donde además se encuentra la Bioincubadora del PCM, que en la actualidad aloja a 36 empresas innovadoras, supone un entorno privilegiado para que los proyectos de empresa que están empezando se desarrollen adecuadamente.
En su opinión ¿En qué medida son innovadores los servicios que se ofrecen desde la Unidad de Biotransformaciones Industriales del Parque Científico de Madrid?
La Unidad, mediante su colaboración con el BTG, supone una herramienta de valor añadido tanto para las empresas asociadas, como para otras empresas y grupos de investigación del sector. La función de los Parques Científicos es precisamente esa, ofrecer todo un sistema de apoyo encaminado a fortalecer la I+D+i.
Nuestra función como entidad se enmarca a su vez dentro de la denominada tercera misión de la Universidad y en su proceso de modernización. Instalaciones científicas costosas, como las que tenemos en la Unidad, se ponen a disposición de la comunidad investigadora, empresas y hospitales, y esa interacción es, en definitiva, la que fortalece nuestra misión en la sociedad, procurando que los avances científico-tecnológicos se concreten en servicios y productos para uso de los ciudadanos.
http://www.madrimasd.org/cienciaysociedad/entrevistas/revista-madrimasd/detalleEmpresa.asp?id=222
viernes, 25 de septiembre de 2009
Curso de Cromatografía HPLC
Lugar: Madrid Fecha: 28, 29 Y 30 de septiembre y 1, 2 de octubre de 2009
Horario: 9:30 a 18:00 h.
PROGRAMA:
(PRIMER DIA) Fundamentos de la técnica de cromatografía HPLC I Fundamentos de la técnica de cromatografía HPLC II
(SEGUNDO DIA) Conceptos básicos sobre las fases móviles en HPLC Nuevos desarrollos de HPLC
(TERCER DIA) Tipos de detectores en HPLC La técnica HPLC/EM
(CUARTO DIA) Validación en métodos en HPLC I Validación en métodos HPLC II
(QUINTO DIA)
Aplicaciones de la técnica a la investigación Aplicaciones de la técnica a la industria
PRÁCTICAS: - VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS Y VERIFICACIÓN DE LA ADECUACIÓN DEL SISTEMA DE UN ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO. - PAUTAS A SEGUIR EN LA CALIFICACIÓN DE UN EQUIPO HPLC. - APLICACIONES DE LOS DETECTORES DE DICROÍSMO CIRCULARQ (DC) Y EVAPORATIVE LIGHT SCATTERING (ELSD). - ANÁLISIS DE SULFAMIDAS POR LC-MS.
OBJETIVO: Introducción a las técnicas de HPLC y su aplicación a laboratorios industriales de control de calidad.
Más información: www.fpcm.es
lunes, 14 de septiembre de 2009
Biotrans 2009 - Bern, Switzerland
Biotrans takes place every two years in Europe with attendance of 500-600 participants from academia and industry, focusing on applied and fundamental aspects of biocatalysis. Biotrans 2009 will take place from July 5 - 9 in Berne, capital city of Switzerland, located in a beautiful setting at the foot of the Alps (http://www.berninfo.com/en/welcome.cfm). Topics: Biotransformations in organic synthesis, Industrial processes & development, Metabolic engineering, Directed evolution & screening, Bioinformatics, protein structure, modeling & mechanisms, Carbohydrate active enzymes Former Biotrans Meetings: Oviedo (ES) 2007 ; Delft (NL) 2005 ; Olomouc (CZ) 2003 ; Darmstadt (D) 2001 ; Taormina Naxos (I) 1999; La Grande Motte (F) 1997; Warwick (UK) 1995: Graz (A) 1993
jueves, 3 de septiembre de 2009
Entrevista - Ibercampus
José Vicente Sinisterra: "Un servicio de calidad a las empresas no se puede prestar si no se investiga y no se está al día de las innovaciones"
José Vicente Sinisterra es responsable de la Unidad de Biotransformaciones Industriales del Parque Científico de Madrid desde su creación en 2006. Sinisterra nos acerca en esta entrevista al funcionamiento de esta herramienta que se acopla a la perfección a la filosofía de todo parque científico "ofrecer todo un sistema de apoyo encaminado a fortalecer la I+D+i".
ibercampus.es
P.- ¿Desde cuándo es Responsable de la Unidad de Biotransformaciones Industriales del PCM?
R.- Soy responsable de la Unidad de Biotransformaciones desde su creación en 2006 por acuerdo entre la Universidad Complutense de Madrid y el Parque Científico de Madrid.
P.- ¿Cuál es la vinculación a la Universidad Complutense de Madrid?
R.- Soy catedrático de la Facultad de Farmacia de la UCM y comparto mi dedicación docente e investigadora en la UCM con mi labor como responsable de la Unidad de Biotransformaciones del PCM.
Un servicio de calidad a las empresas no se puede prestar si no se investiga y no se está al día de las innovaciones que van surgiendo, por ello siempre he pretendido que la Unidad de Biotransformaciones Industriales del Parque cuente con el apoyo y colaboración del Grupo de investigación de calidad de la UCM/CM – Grupo de Biotransformaciones (BTG) – donde hay investigadores de la UCM, UAM y CSIC. Este grupo de investigación tiene investigadores de prestigio europeo en los campos de biotecnología, química orgánica y desarrollo farmacéutico. Asimismo hay que indicar que parte del equipamiento científico de la Unidad ha sido adquirido por el Grupo de Investigación de Biotransformaciones Industriales utilizándose tanto para la investigación como para los servicios de apoyo a las empresas.
P.- ¿De qué personal dispone la Unidad?
R.- La Unidad de Biotransformaciones se compone de dos técnicos Torres Quevedo y un técnico contratado del PCM. Todos ellos prestan una dedicación al 100% a la Unidad. Asimismo contamos con la colaboración de tres becarios de investigación de BTG, que también colaboran en trabajos de la Unidad para empresas y OPIs. Asimismo, contamos en la Unidad con la colaboración de estudiantes, a través de convenios de intercambio como el que mantiene el PCM con el ICEP de Portugal, y procedentes de Másteres en Biotecnología de la UAM.
P.- ¿Con qué áreas de conocimientos relacionan los servicios que presta la Unidad de Biotransformaciones Industriales?
R.- La labor de apoyo a empresas que desarrolla la Unidad de Biotransformaciones Industriales no se circunscribe a un área de conocimiento concreto, ya que este concepto, de indudable utilidad docente, esta desfasado desde el punto de vista de la actual I+D+i. Nuestra labor abarca distintas áreas de trabajo como la Biotecnología (que no posee un área de conocimiento específica a diferencia de Europa o USA), la Química Orgánica, la Microbiología industrial, la Química Farmacéutica, Química Analítica o la Tecnología Farmacéutica. Todas ellas intervienen en las distintas industrias con las que colaboramos: alimentaria, farmacéutica, cosmética, etc.
P.- ¿Qué valor añadido aportan los servicios de la Unidad de Biotransformaciones a la comunidad investigadora y productiva del sector farmacéutico?
R.- La tarea de la Unidad de Biotransformaciones Industriales del PCM es aportar servicios de apoyo a la I+D+i siguiendo normas ISO 9000, tanto a empresas, grupos de investigación y hospitales, de todas las áreas mencionadas anteriormente. En este sentido, la Unidad de Biotransformaciones dispone, tanto de un equipo científico altamente cualificado, así como un equipamiento e infraestructuras de última generación para la realización de distintos servicios científicos.
P.- ¿Cuáles son los servicios científicos más innovadores que ofrece la Unidad de Biotransformaciones y de qué forma redundan en los productos o servicios que se comercializan en la actualidad?
R.- Los servicios que ofrecemos son muy diversos y se engloban en dos categorías: análisis y control de calidad, por un lado, y apoyo a las empresas en I+D+i, por otro.
Realizamos análisis y control de calidad según la normativa vigente de farmacopea. Este trabajo es necesario para que una empresa pueda presentar sus productos en el mercado con una garantía de fiabilidad. Es un requisito indispensable en las industrias farmacéutica, cosmética y alimentaría, biotecnológica y de química fina.
También se prestan servicios de microbiología industrial trabajando con microorganismos procariotas para la producción de enzimas o de metabolitos de interés.
P.- ¿Cuáles son los retos inmediatos de la Unidad de Biotransformaciones Industriales?
R.- El reto fundamental de la Unidad de Biotransformaciones es la creación de un laboratorio dotado de normas GLP y la implantación de un servicio de calidad homologable por la Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitarios que abra al PCM un nuevo campo de trabajo de apoyo tanto a las empresas incubadas en el PCM, como al resto de empresas y de potenciales usuarios de estos servicios.
Por otro lado, desde la Unidad también se imparten cursos teórico-prácticos, en el marco del programa de formación del Parque Científico de Madrid, sobre cromatografía líquida y su aplicación a laboratorios industriales de control de calidad, de cromatografía de gases y de formación de postgrado en tecnología farmacéutica.
P.- ¿Qué tipo de usuario utiliza los servicios de la Unidad de Biotransformaciones?
R.- Prestamos servicios a un amplio espectro de usuarios, siendo en su mayoría empresas privadas externas al PCM, tales como: Abbott S.A., Cantabria Pharma, LETI,…, seguido de empresas incubadas en el propio Parque Científico de Madrid, como Apoteknos, así como a grupos de investigación de las universidades Complutense, Autónoma y del CSIC.
P.- ¿Qué ventajas supone la Unidad de Biotransformaciones para las empresas biotecnológicas incubadas en el PCM?
R.- Las ventajas son numerosas. Las empresas asociadas en el Parque Científico de Madrid, y en este caso concreto las biotecnológicas, pueden acceder a un servicio necesario para desarrollar su actividad a un coste muy asequible. El servicio prestado les permite poder presentar dossieres en Agencias de control de calidad de producción españolas o europeas, al seguirse la normativa de la Farmacopea y ASTM en los ensayos que se realizan. Esta política, aplicable también para el resto de plataformas tecnológicas que ofrece el PCM, permite a la comunidad emprendedora disponer de todas las infraestructuras científicas para lograr el éxito de sus proyectos empresariales. La Unidad de Biotransformaciones del PCM tiene a su disposición el asesoramiento del Grupo de Investigación de la Universidad Complutense de Madrid, homologado por la Comunidad de Madrid, pudiendo acceder también a los servicios científicos de esta última, lo que le sitúa en un referente consolidado y de prestigio para los usuarios.
La colaboración con el BTG, de reconocido prestigio europeo en el campo de la Biotecnología, y la presencia en el edificio del PCM en Tres Cantos, donde además se encuentra la Bioincubadora del PCM, que en la actualidad aloja a 36 empresas innovadoras, supone un entorno privilegiado para que los proyectos de empresa que están empezando se desarrollen adecuadamente.
P.- ¿Qué aporta la Unidad de Biotransformaciones Industriales a la I+D+i?
R.- La Unidad de Biotransformaciones Industriales, mediante su colaboración con el BTG, supone una herramienta de valor añadido tanto para las empresas asociadas, como para otras empresas y grupos de investigación. La función de los Parques Científicos es precisamente esa, ofrecer todo un sistema de apoyo encaminado a fortalecer la I+D+i.
El papel de la Unidad de Biotransformaciones se refuerza además con la presencia en congresos internacionales donde los miembros científicos del grupo han sido conferenciantes invitados. Así, recientemente la Unidad ha presentado tres trabajos en el Congreso Biotrans-09 celebrado en Berna en Julio 2009, que se han realizado parcialmente en la Unidad de Biotransformaciones y una comunicación oral en el Congreso Europeo de Carbohidratos, celebrado en Viena en Julio 2009.
La unidad figura en los trabajos que realizan parcialmente en la misma. Entre ellos podemos citar como más significativos de 2009, los siguientes:
CARBALLEIRA J.D., FERNANDEZ-LUCAS J., QUEZADA M.A., HERNAIZ M.J., ALCANTARA A.R., SIMEO Y, SINISTERRA J.V. Industrial Biotransformations. Encyclopedia of Microbiology.
Schaechter M. ed. Elsevier, :Oxford (UK). 212-251 (2009)
ALMENDROS M., SINISTERRA J.V., BERENGUER J. Thermus thermophilus strains active in purine nucleoside synthesis. Molecules 14, 1279-1287(2009)
SIMEO Y, SINISTERRA J.V. Biotransformation of terpenoids: A green alternative for producing molecules with pharmacological activity Mini-Reviews in Organic Chemistry 6(2), 128-134 (2009)
SIMEO Y, SINISTERRA J.V.,ALCANTARA A.R. Regioselective enzymatic acylation of pharmacologically interesting nucleosides in 2-methyltetrahydrofuran, a greener substitute of THF. Geren Chemistry 11, 855-862 (2009).
Por último mencionar que este mes de septiembre se va a presentar en la UCM una tesis doctoral realizada por un becario mexicano del BTG, elaborada parcialmente en la Unidad.
Fuente: Parque Científico de Madrid
miércoles, 2 de septiembre de 2009
Regioselective enzymatic acylation of pharmacologically interesting nucleosides in 2-methyltetrahydrofuran, a greener substitute for THF
Regioselective enzymatic acylation of pharmacologically interesting nucleosides in 2-methyltetrahydrofuran, a greener substitute for THF
Yolanda Simeó, José Vicente Sinisterra and Andrés R. Alcántara
1--Arabinofuranosyl uracil, 9--arabinofuranosyl adenosine, 2-O-(2-methoxyethyl)-5-methyl uridine, adenosine and uridine were enzymatically acylated with hexanoic anhydride and vinyl esters by CALB lipase (lipase B from Candida antarctica) with excellent regioselectivity in many cases and analytical reaction yields above 90%. The influence of the stereochemistry of the hydroxyl group on C-2 was studied. Some of these esterifications were carried out in 2-methyltetrahydrofuran (MeTHF), which is described as an excellent substitute for THF in biocatalysed processes in organic media. This application for this green solvent is a proof-of-concept opening the use of MeTHF in biotransformations.
miércoles, 13 de mayo de 2009
Microbial cells as catalysts for stereoselective red-ox reactions - Biotechnology Advances 2009
- Industrial Biotransformations Service, Scientific Park of Madrid, C/ Santiago Grisolía n° 2, Tres Cantos, 28760 Madrid, Spain
- Molecular Interactions Service, Scientific Park of Madrid, Faculty of Pharmacy, Universidad Complutense, 28040 Madrid, Spain
- Biotransformations Group, Department of Organic & Pharmaceutical Chemistry, Faculty of Pharmacy, Universidad Complutense, 28040 Madrid, Spain
In this review we present an overview of the state of the art of red-ox biotransformations catalyzed by whole cells - wild-type or genetically engineered microorganisms. Stereoselective reductions, hydroxylations of arenes and unfunctionalized alkanes, alkene monooxygenation, Baeyer-Villiger reactions are among the processes described along the text, focusing in their chemo-, regio- and stereoselectivity.
Keywords: Biotransformations; Biocatalysis; Whole-cell-catalysts; Cell-factories; Designer-bugs Immobilization of cells; stereoselective reactions; red-ox reactions
miércoles, 15 de abril de 2009
Efficient Horner-Wadsworth-Emmons intramolecular cyclisation of a N-substituted phthalimide promoted by KF-Alumina: a general tool for the synthesis o
An intramolecular Horner-Wadsworth-Emmons reaction promoted by KF-Alumina involving a N-substituted phthalimide, cleanly and efficiently furnishes an interesting α,β-unsaturated tricyclic enone which may undergo selective alkylations at the α’-position.
viernes, 27 de marzo de 2009
Growth hormone improves lipoprotein concentration and arylesterase activity in mice with an atherogenic lipid profile induced by lactalbumin
A global benchmark study using affinity-based biosensors
Keywords: Biacore; Kinetics; Optical biosensor; Surface plasmon resonance
Glycan Tagging to Produce Bioactive Ligands for a Surface Plasmon Resonance (SPR) Study via Immobilization on Different Surfaces.
Departamento de Quimica Organica y Farmaceutica, Universidad Complutense de Madrid, Plaza Ramon y Cajal s/n. 28040 Madrid, Spain
Departamento de Quimica Organica, Universidad Autonoma de Madrid, Campus de Cantoblanco, 28049 Madrid, Spain
Departamento de Ciencia de Proteinas, CIB-CSIC, c/Ramiro de Maeztu 9, 28040 Madrid, Spain, Institut fur Physiologische Chemie, Tierarztliche Fakultat, Ludwig-Maximilians-Universitat, Munchen, Veterinarstr 13, 80539 Munchen, Germany
Biotransformations. vol. 1, pp. 212-251. Encyclopedia of Microbiology 3rd Edition. Oxford. Elsevier
The application of whole-cell-catalyzed biotransformations is an emerging field that opens up a myriad of new possibilities for the industrial application of biocatalysts. In this article, the new technologies to design tailor-made cells for specific reactions as well as some interesting applied processes catalyzed by intracellular enzymes are presented.
Encyclopedia of Microbiology
Moselio Schaechter, San Diego State University, CA, USA
Six-Volume Set, 1-6 Hardbound, 4600 pages, publication date: APR-2009
ISBN-13: 978-0-12-373939-1
ISBN-10: 0-12-373939-X
Imprint: ACADEMIC PRESS
Monascus kaoliang CBS 302.78 immobilized in polyurethane foam using iso-propanol as co-substrate: Optimized immobilization conditions of a fungus as b
Industrial Biotransformations Service, Scientific Park of Madrid, C/Santiago Grisolia No. 2, Parque Tecnológico de Madrid, 28760 Tres Cantos, Madrid, Spain
Monascus kaoliang was selected after a microbial screening as a highly active and selective whole cell catalyst for the reduction of ketones. In the present paper we describe the optimum growing conditions and an interesting immobilization procedure by adsorption in polyurethane foams (PUFs). This methodology is easy to perform and the immobilized catalyst is active, stable and reusable. The use of different co-substrates for cofactor regeneration was also tested and iso-propanol (i-PrOH) was found as the best co-substrate, as it leads to a catalyst reusable for 17 cycles, displaying better NADH regeneration properties than others e.g., glucose (10 cycles) or saccharose (6 cycles). The reduction of different prochiral ketones showed that the ketone reductase activity of this mould follows the Prelog’s rule and kinetic experiments demonstrated that the process follows a pseudo-first kinetic order.
Biotransformation of Terpenoids: A Green Alternative for Producing Molecules with Pharmacological Activity
Mini Reviews in Organic Chemistry 2009
Defining the Epitope Region of a Peptide from the Streptomyces coelicolor Phosphoenolpyruvate:Sugar Phosphotransferase System Able to Bind to the Enzy
The bacterial PEP:sugar PTS consists of a cascade of several proteins involved in the uptake and phosphorylation of carbohydrates, and in signal transduction pathways. Its uniqueness in bacteria makes the PTS a target for new antibacterial drugs. These drugs can be obtained from peptides or protein fragments able to interfere with the first reaction of the protein cascade: the phosphorylation of the HPr by the first enzyme, the so-called enzyme EI. To that end, we designed a peptide, HPr9–30, spanning residues 9 to 30 of the intact HPr protein, containing the active site histidine (His-15) and the first α-helix of HPr of Streptomyces coelicolor, HPrsc. By using fluorescence and circular dichroism, we first determined qualitatively that HPrsc and HPr9–30 did bind to EIsc, the enzyme EI from S. coelicolor. Then, we determined quantitatively the binding affinities of HPr9–30 and HPrsc for EIsc by using ITC and STD-NMR. The STD-NMR experiments indicate that the epitope region of HPr9–30 was formed by residues Leu-14, His-15, Ile-21, and Val-23. The binding reaction between EIsc and HPrsc is enthalpy driven and in other species is entropy driven; further, the affinity of HPrsc for EIsc was smaller than in other species. However, the affinity of HPr9–30 for EIsc was only moderately lower than that of EIsc for HPrsc, suggesting that this peptide could be considered a promising hit compound for designing new inhibitors against the PTS.
Abbreviations: PEP, phosphoenolpyruvate; CD, circular dichroism; EIsc, enzyme I of Streptomyces coelicolor; EIec, enzyme I of E. coli; HPrec, histidine phosphocarrier protein of Escherichia coli; HPrsc, histidine phosphocarrier protein of Streptomyces coelicolor; HPr9-30, peptide comprising residues Gly-9 to Gly-30 of the intact HPrsc; ITC, isothermal titration calorimetry; NMR, nuclear magnetic resonance; PTS, sugar phosphotransferase system; STD, saturation transfer difference; TFE, trifluoroethanol; TSP, sodium trimethylsilyl [2,2,3,3-2H4] propionate; UV, ultraviolet
jueves, 26 de marzo de 2009
Versatile strategy for the synthesis of biotin-labelled glycans, their immobilization to establish a bioactive surface and interaction studies with a
Electronic supplementary material The online version of this article (doi:10.1007/s10719-008-9115-y) contains supplementary material, which is available to authorized users.
Esterification reactions catalyzed by lipases immobilized in organogels: effect of temperature and substrate diffusion
Institute of Biological Research and Biotechnology, National Hellenic Research Foundation, Athens, Greece
Biotransformations Group, Faculty of Pharmacy, Universidad Complutense, Madrid, Spain
Biological Applications and Technologies Department, University of Ioannina, Ioannina, Greece